| Doctorant : |
Brendan ALLIGAND
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| Directeur de thèse : |
Fabrice FLEURY ,
Professeur Université |
| co-directeur de thèse : | François Valette, Professeur, Université de Nantes |
| Encadrant : | Magali Le Breton, Maître de Conférences, Université de Nantes |
| Financement : |
Université de Nantes |
| Date de la soutenance : |
jeudi 26 novembre 2015, 14h00 |
| Modalité : |
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| Jury : |
- Rapporteur : Mauro Modesti, Directeur de Recherche CNRS, Université de Marseille
- Rapporteur : Benoît Chesnais, Professeur, Université du Maine
- Examinateur : Sophie Barille-Nion, Chargée de Recherche INSERM, Université de Nantes
- Examinateur : Pascal Bertrand, Directeur de Recherche CEA, Paris
- Directeur de thèse :
Fabrice FLEURY ,
Professeur Université
- co-directeur de thèse : François Valette, Professeur, Université de Nantes
- Encadrant : Magali Le Breton, Maître de Conférences, Université de Nantes
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La Recombinaison Homologue (RH) permet la réparation des dommages à l’ADN les plus délétères : les Cassures double brin. L’étape centrale de la RH est basée sur l’activité d’échange de brins de RAD51. Ainsi, l’activité de RAD51 est cruciale pour le maintien de l’intégrité génomique. Toutefois, cette protéine possède également un côté sombre. En effet, la surexpression de RAD51 permet aux cellules cancéreuses de résister aux traitements. Ce qui en fait une cible thérapeutique potentielle pour sensibiliser les cellules cancéreuses au traitement. Une meilleure compréhension du contrôle de l’activité de RAD51 aiderait sûrement à développer des stratégies thérapeutiques. L’activité de RAD51 est régulée par des phosphorylations et plusieurs kinases sont connues pour cibler RAD51. C’est le cas de la kinase c-Abl qui phosphoryle les tyrosines Y54 et Y315 en réponse aux dommages à l’ADN. Mais le rôle de ces phosphorylations est peu connu. C’est pourquoi nous nous sommes intéressés à l’effet de ces phosphorylations sur RAD51. Dans ce but, nous avons produit des mutants de RAD51 mimant la phosphorylation. Leur activité a été analysée et comparée in vitro. Nous avons démontré que le mutant équivalent à une double phosphorylation est incapable de réaliser l’échange de brins. Un défaut de polymérisation de RAD51 serait à l’origine de cette inhibition. Par la suite, la régulation a été étudiée dans le contexte cellulaire. Les résultats préliminaires montrent un effet de la double phosphorylation sur la localisation cellulaire de RAD51. L’inactivation de RAD51 par cette double phosphorylation pourrait participer à la régulation de la voie de la Recombinaison Homologue et serait une étape clef dans la compréhension de la réponse aux dommages à l’ADN
Publications
2017
Alligand, Brendan; Breton, Magali Le; Marquis, Damien; Vallette, François; Fleury, Fabrice
Functional effects of diphosphomimetic mutations at cAbl-mediated phosphorylation sites on Rad51 recombinase activity Article de journal
Dans: Biochimie, vol. 139, p. 115–124, 2017, ISSN: 61831638.
@article{Alligand2017,
title = {Functional effects of diphosphomimetic mutations at cAbl-mediated phosphorylation sites on Rad51 recombinase activity},
author = {Brendan Alligand and Magali {Le Breton} and Damien Marquis and François Vallette and Fabrice Fleury},
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journal = {Biochimie},
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publisher = {Elsevier Ltd},
abstract = {Homologous Recombination enables faithful repair of the deleterious double strand breaks of DNA. This pathway relies on Rad51 to catalyze homologous DNA strand exchange. Rad51 is known to be phosphorylated in a sequential manner on Y315 and then on Y54, but the effect of such phosphorylation on Rad51 function remains poorly understood. We have developed a phosphomimetic model in order to study all the phosphorylation states. With the purified phosphomimetic proteins we performed in vitro assays to determine the activity of Rad51. Here we demonstrate the inhibitory effect of the double phosphomimetic mutant and suggest that it may be due to a defect in nucleofilament formation.},
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Homologous Recombination enables faithful repair of the deleterious double strand breaks of DNA. This pathway relies on Rad51 to catalyze homologous DNA strand exchange. Rad51 is known to be phosphorylated in a sequential manner on Y315 and then on Y54, but the effect of such phosphorylation on Rad51 function remains poorly understood. We have developed a phosphomimetic model in order to study all the phosphorylation states. With the purified phosphomimetic proteins we performed in vitro assays to determine the activity of Rad51. Here we demonstrate the inhibitory effect of the double phosphomimetic mutant and suggest that it may be due to a defect in nucleofilament formation.
2015
Alligand, Brendan
Étude du rôle des phosphorylations de Rad51 en Y54 et en Y315 sur son fonctionnement Thèse
Université de Nantes, 2015.
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La Recombinaison Homologue (RH) permet la réparation des dommages à l’ADN les plus délétères : les Cassures double brin. L’étape centrale de la RH est basée sur l’activité d’échange de brins de RAD51. Ainsi, l’activité de RAD51 est cruciale pour le maintien de l’intégrité génomique. Toutefois, cette protéine possède également un côté sombre. En effet, la surexpression de RAD51 permet aux cellules cancéreuses de résister aux traitements. Ce qui en fait une cible thérapeutique potentielle pour sensibiliser les cellules cancéreuses au traitement. Une meilleure compréhension du contrôle de l’activité de RAD51 aiderait sûrement à développer des stratégies thérapeutiques. L’activité de RAD51 est régulée par des phosphorylations et plusieurs kinases sont connues pour cibler RAD51. C’est le cas de la kinase c-Abl qui phosphoryle les tyrosines Y54 et Y315 en réponse aux dommages à l’ADN. Mais le rôle de ces phosphorylations est peu connu. C’est pourquoi nous nous sommes intéressés à l’effet de ces phosphorylations sur RAD51. Dans ce but, nous avons produit des mutants de RAD51 mimant la phosphorylation. Leur activité a été analysée et comparée in vitro. Nous avons démontré que le mutant équivalent à une double phosphorylation est incapable de réaliser l’échange de brins. Un défaut de polymérisation de RAD51 serait à l’origine de cette inhibition. Par la suite, la régulation a été étudiée dans le contexte cellulaire. Les résultats préliminaires montrent un effet de la double phosphorylation sur la localisation cellulaire de RAD51. L’inactivation de RAD51 par cette double phosphorylation pourrait participer à la régulation de la voie de la Recombinaison Homologue et serait une étape clef dans la compréhension de la réponse aux dommages à l’ADN.
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